單克隆抗體第-***次篩選是制備過程中的關(guān)鍵步驟，涉及抗原特異性、抗體分泌量和細(xì)胞生長(zhǎng)特性等多方面評(píng)估。通過精細(xì)操作和科學(xué)流程，確保篩選出特性優(yōu)良的雜交瘤細(xì)胞株，為后續(xù)研究與應(yīng)用奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。下面***起來看下單克隆抗體第-***次篩選的方法：

第-***次篩選

***先，在已免疫過的B淋巴細(xì)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）和骨-髓瘤細(xì)胞進(jìn)行雜交時(shí)，可能出現(xiàn)的情況應(yīng)該先弄清楚。

如果只考慮兩兩融合，可能的情況有：（效應(yīng)）B淋巴細(xì)胞和（效應(yīng)）B淋巴細(xì)胞的融合；（效應(yīng)）B淋巴細(xì)胞和骨-髓瘤細(xì)胞的融合（即雜交瘤細(xì)胞）；骨-髓瘤細(xì)胞和骨-髓瘤細(xì)胞的融合（即瘤瘤細(xì)胞）。

第-***類細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下，因?yàn)闊o法無限增殖，***-終死亡，因此，篩選的關(guān)鍵是限制第二類細(xì)胞的增殖。科學(xué)***在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，已經(jīng)考慮到這方面問題，所以他們選擇的瘤細(xì)胞是有遺傳缺陷的，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷（TK－）或者次黃嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶（HGPRT－）缺陷。

篩選的目的：獲得雜交瘤細(xì)胞。

篩選的方法： 用選擇性培養(yǎng)基來完成，即HAT培養(yǎng)基。

加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的培養(yǎng)基稱HAT培養(yǎng)基。

其中，氨基喋呤可阻斷DNA合成的主要途徑。主要途徑阻斷后，依靠應(yīng)急途徑即在HGPRT（次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黃嘌呤合成DNA，缺少其中***種，DNA合成不能發(fā)生。

用于雜交的骨-髓瘤細(xì)胞系均由經(jīng)有毒-藥物誘導(dǎo)而成選擇產(chǎn)生的代謝缺陷型細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)均無TK或HGPRT，所以單個(gè)或融合骨-髓瘤細(xì)胞在HAT培養(yǎng)液中將死亡。B細(xì)胞雖然有HGPRT和TK，但在體外通常培養(yǎng)條件下，尤其是在單個(gè)細(xì)胞環(huán)境下難于長(zhǎng)期存活和增殖傳代。

因此，只有雜交瘤細(xì)胞才能在HAT培養(yǎng)液中生長(zhǎng)繁殖。

即:

①淋巴細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，5到7天死亡；DNA的主要合成途徑被A阻斷。

②骨-髓瘤細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，5到7天死亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途經(jīng)受阻。

③骨-髓瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，可長(zhǎng)期生長(zhǎng)繁殖。利用淋巴細(xì)胞的HGRT將H合成為嘌呤堿并***-終與T***起合成DNA從淋巴細(xì)胞獲得產(chǎn)生某種抗體的遺傳信息，從骨-髓瘤細(xì)胞獲得不斷繁殖的能力。

由于通過以上方法選擇出雜交瘤細(xì)胞，雖然都是雜交瘤細(xì)胞，但可能是同***抗原的不同抗原決定簇刺激產(chǎn)生的。所以產(chǎn)生抗體是不純的。如果不進(jìn)***步提純，這樣得到的是多克隆抗體，所以，需要第二次篩選。

(文章來源于儀器網(wǎng))