熒光分光光度計的操作步驟：

1.開機：接通電源，打開主機開關，點燃(打開)光源后,根據說明書要求啟動計算機。

2.檢測前準備：參照儀器說明書,在20天內至少進行***次激發(fā)校準和發(fā)射校準，檢測前儀器應預熱。

3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應在20°C土5°C;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定，無磁場、電場干擾。根據樣品的特性及熒光強度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應時間等)。

4.基本測定

(1)熒光激發(fā)光譜測定

設置儀器參數，掃描發(fā)射波長，找到maxhem，以此為發(fā)射波長，記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數，便得到激發(fā)光譜。

(2)英光發(fā)射光譜測定

設置儀器參數，掃描激發(fā)波長，找到maxhex以此為激發(fā)波長，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數關系，便得到熒光發(fā)射光譜。

(3)差譜測定

設置儀器參數，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來，在***定的工作方式下掃描樣品溶液的發(fā)射波長，得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。

(4)峰面積積分

選擇適當的工作方式，對樣品溶液進行積分操作，即得到峰面積積分。

(5)熒光強度

選擇合適的測量參數，設置入ex、hem，采用定點讀數或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強度。

(6)定量測定

配制***系列已知濃度的標準溶液，在***定的測定條件下，設置入ex、入em，按照由稀至濃的次序，測定標準溶液的熒光強度，繪制熒光強度***濃度的工作曲線，不改變儀器參數測定未知溶液的熒光強度由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。

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