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蛋白印跡儀的操作步驟

2025-01-10 09:15:13

蛋白印跡儀主要用于生物樣本的洗滌和孵育,能夠全自動化完成“封閉-洗膜-孵育***抗-洗膜-孵育二抗-洗膜”全過程。通過特定的抗體與蛋白質(zhì)結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物,進而實現(xiàn)蛋白質(zhì)的定性和半定量檢測。

 

  操作步驟通常包括:

 

  準(zhǔn)備工作:清潔并消毒工作臺,穿戴適當(dāng)?shù)膫€人防護裝備,并準(zhǔn)備好所有必要的試劑、樣品和耗材。

 

  樣品加載:取出電泳膠片,并將其放置在印跡轉(zhuǎn)移槽中。將需要測試的蛋白樣品加入到相應(yīng)孔位中。

 

  膠片轉(zhuǎn)移:關(guān)閉槽蓋后,將印跡轉(zhuǎn)移槽放置在電泳槽中心位置。設(shè)置合適的參數(shù)(如時間、溫度等),啟動轉(zhuǎn)移程序進行蛋白質(zhì)向膠片上轉(zhuǎn)移。

 

  洗滌過程:完成蛋白質(zhì)傳輸后,取出膠片并將其放入洗滌緩沖液中輕輕搖動,以去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)。根據(jù)實驗需求,可重復(fù)該步驟多次。

 

  特異性結(jié)合:將膠片放入含有特定抗體的洗滌緩沖液中,并在適當(dāng)?shù)臈l件下孵育***段時間,以實現(xiàn)抗原與抗體的特異性結(jié)合。

 

  洗凈步驟:將膠片移至新的洗滌緩沖液中進行反復(fù)洗凈,在每個洗滌周期結(jié)束后換用新的緩沖液。確保完全去除非特異性結(jié)合物和雜質(zhì)。

 

  顯色反應(yīng):添加顯色試劑到膠片上,觀察并記錄顏色變化。顯色時間應(yīng)注意控制,避免過度顯色造成信號失真或影響結(jié)果解讀。

 

  停止反應(yīng):使用適當(dāng)?shù)脑噭┗蚍椒ㄍV姑富钚缘认嚓P(guān)過程。

 

  影像捕獲與分析:使用相應(yīng)設(shè)備(如CCD相機)拍攝膠片圖像,并保存為數(shù)字文件。可以使用圖像分析軟件對圖像進行定量和質(zhì)量評估。

 

  清理工作臺與維護設(shè)備:完成操作后,清潔工作臺并處理廢棄物和使用過的耗材。根據(jù)制造商提供的指導(dǎo)對設(shè)備進行定期維護。


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