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液相色譜柱的更換方式有哪些要點

2025-07-10 09:13:17

***、更換前的準備

  1. 確認新柱規格

  - 核對新色譜柱的型號、填料類型(如C18、硅膠基質等)、粒徑(如5 μm、3 μm)、孔徑、pH耐受范圍及流速上限,確保與原有系統兼容。

  - 檢查流動相體系是否與新柱匹配(如反相柱需避免使用強堿性流動相)。

  2. 工具與材料準備

  - 專用扳手(用于擰緊柱接頭)、清潔紙巾、廢液容器、適合的流動相(如甲醇、乙腈或超純水)。

  - 若使用UHPLC系統,需確認新柱的壓力耐受值(通常≥100 bar)。

  3. 系統狀態檢查

  - 記錄當前系統的運行參數(如流速、壓力、波長等),以便更換后對比。

  - 提前配制足量的新流動相,并脫氣處理。

  二、停機與舊柱拆卸

  1. 停機操作

  - 停止泵運行,關閉檢測器(如UV燈)、自動進樣器等模塊電源,避免系統壓力突變導致液體噴濺。

  - 打開排泄閥,釋放系統內殘余壓力。

  2. 拆卸舊柱

  - 斷開入口端接頭:用扳手逆時針擰動入口管路螺母,小心取下管路,避免液體灑出。

  - 標記方向:記錄舊柱標簽上的流向箭頭(通常為“IN”和“OUT”),確保新柱安裝方向***致。

  - 取出舊柱:垂直向上拔出色譜柱,避免碰撞柱管導致物理損傷。

  - 清理接頭:用甲醇或異丙醇擦拭舊柱兩端的接頭,清除殘留顆粒或緩沖鹽。

  三、新柱安裝與系統重啟

  1. 安裝新柱

  - 檢查密封墊:確認柱兩端的密封墊(如PEEK或不銹鋼材質)無破損,必要時更換。

  - 對齊方向:嚴格按照“IN”端接泵、“OUT”端接檢測器的方向安裝,裝反會導致分離失效。

  - 擰緊接頭:用手將管路螺母旋至接觸柱體,再用扳手輕壓至密封(通常1/4~1/2圈),避免過度用力導致柱頭損壞。

  2. 系統沖洗與平衡

  - 初始流速:以較低流速(如0.2~0.5 mL/min)通入新流動相,排出柱內空氣。

  - 梯度平衡:若舊流動相與新柱不兼容(如從含緩沖鹽切換至純有機相),需分段過渡(如先用甲醇沖洗,再切換至目標流動相)。

  - 基線穩定:持續沖洗15~30分鐘,直至檢測器基線平穩(UV噪聲<0.5 mAU),壓力值正常。

  四、性能驗證與參數優化

  1. 測試分離效果

  - 注入標準樣品(如萘、甲苯等非保留物質或目標分析物),檢查峰形是否對稱、柱效(以塔板數衡量)是否達標。

  - 對比新舊柱的保留時間、分離度及理論塔板數,確認新柱性能恢復。

  2. 調整運行參數

  - 根據新柱特性微調流速(如粒徑更小的填料需降低流速)、柱溫或梯度程序。

  - 避免超過新柱的壓力上限(如常規C18柱壓力限制為40~60 bar)。

  五、注意事項與常見故障處理

  1. 關鍵操作禁忌

  - 禁止反向安裝:裝反會導致固定相流失、柱壓驟升甚至堵塞。

  - 避免干柱狀態:柱內無流動相時切勿運行泵,否則會損壞填料。

  - 慎用強酸/堿:超出柱子pH耐受范圍(如硅膠柱pH 2~8)會加速填料溶解。

  2. 典型問題排查

  - 壓力異常:若新柱壓力遠高于舊柱,檢查接頭是否漏液、填料是否堵塞或流速設置過大。

  - 峰形拖尾:可能因流動相未充分平衡、樣品過載或舊柱污染殘留。

  - 氣泡問題:系統重啟后需排氣,可通過快速沖洗或超聲波處理消除。


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